Готовые смеси для ПЦР 5X qPCRmix-HS c красителем ROX

В зависимости от решаемой задачи, для регистрации накопления продуктов амплификации могут быть использованы различные системы детекции: как интеркалирующие красители (SYBR Green I, EvaGreen и др.), так и меченые пробы (напр. TaqMan). Пассивный референсный краситель ROX обеспечивает нормирование сигналов репортерной флуоресценции, что позволяет корректировать флуктуацию сигналов между пробами в пределах эксперимента. В данных смесях ROX имеет максимум возбуждения флуоресценции при 578 нм и максимум испускания при 600 нм.

В состав смесей 5X qPCRmix-HS HighROX и 5X qPCRmix-HS LowROX входят следующие компоненты: HS Taq ДНК полимераза, референсный краситель ROX, смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, Mg²⁺ и реакционный буфер. Для постановки ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, матрицу ДНК, краситель или пробу для детекции продукта ПЦР и воду.

Реакционный буфер оптимизирован для специфичной работы HS Taq ДНК полимеразы, а также для длительного хранения и многократного замораживания-размораживания смеси. Концентрация ионов магния в 1X реакционной смеси – 3 мМ, концентрация каждого дезоксинуклеозидтрифосфата – 0.12 мМ.

• Краситель ROX позволяет нормировать сигнал репортерной флуоресценции.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Горячий старт ПЦР повышает специфичность реакции.

• Смеси не рекомендуется использовать для прямой амплификации с крови.
• Смеси не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 1 т.п.о. Для амплификации длинных фрагментов ДНК рекомендуется использовать Encyclo полимеразу.