Интеркалирующий краситель SYBR Green I для ПЦР-РВ

SYBR Green I – интеркалирующий краситель, специфичный к двухцепочечной ДНК. Раствор оптимизирован для применения в ПЦР с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Краситель рекомендуется использовать как 50X раствор, при оптимизации условий ПЦР допускается применять в диапазоне от 25Х до 100Х. Входящий в комплект раствор 100% DMSO можно добавлять вплоть до конечного содержания 5%. Оптимизация ПЦР при использовании SYBR Green I

Состав: SYBR Green I в буферном растворе, pH 8.0

Спектральные свойства: длина волны возбуждения – 497 нм, флуоресценции – 521 нм

Принцип действия
SYBR Green I – интеркалирующий краситель, интенсивность флуоресценции которого увеличивается на несколько порядков при встраивании в двухцепочечную ДНК. Поэтому в ходе ПЦР при накоплении продукта амплификации сигнал флуоресценции возрастает, образуя кривую сигмоидной формы (рис. А).

Амплификация фрагмента геномной ДНК человека (200 п.о.) Использованы разведения геномной ДНК человека с шагом в 4 раза (от 125 нг/реакцию до 7.5 пг/реакцию) А: кривые амплификации; Б: кривые плавления ПЦР-продуктов.

Поскольку SYBR Green I связывается с любой двухцепочечной ДНК, увеличение флуоресценции в ПЦР может быть связано с накоплением как специфического продукта, так и неспецифического (димеры праймеров, неспецифический отжиг праймеров). В реакции без матрицы уровень флуоресценции может превышать пороговый уровень не вследствие контаминации матрицей, а из-за образования димеров праймеров. Для получения корректных результатов после окончания реакции необходимо дополнительно проанализировать результат ПЦР с помощью построения так называемой "кривой плавления" (melt curve).

Анализ кривой плавления
Кривая плавления должна быть построена в диапазоне от температуры на 5–10 °C ниже температуры плавления праймера (Tm) до температуры полной денатурации (примерно 95 °C). Обычно кривая строится после проведения ПЦР. Анализировать кривую удобнее всего в координатах -d(RFU)/dT от t° (обратная зависимость скорости от температуры, рис. Б).

Совместимость с приборами
SYBR Green I совместим с любыми приборами для проведения амплификации в режиме реального времени.

Совместимость с компонентами ПЦР
50Х SYBR Green I совместим с референсным красителем ROX, с любыми неокрашенными реакционными буферами, а также с полимеразами любого типа, вне зависимости от наличия 5’ или 3’ экзонуклеазной активности. 50Х SYBR Green I может использоваться в реакциях с добавлением dUTP и урацилгликозилазы. При использовании рекомендуется применять полимеразы с "горячим стартом".

ПРОДУКТ	КАТ.#	СОСТАВ	КОЛ-ВО	ЦЕНА, РУБ.	ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Цена действительна на территории РФ и не включает доставку, а также не включает затраты на оформление договора для заказов с суммой менее 10 тысяч рублей. Продукты предназначены только для научно-исследовательских работ. Продукты не предназначены для лечения или диагностики заболеваний.
50Х SYBR Green I для ПЦР-РВ	PB025S	50Х SYBR Green I , 0.1 мл DMSO, 1 мл	200 р-ций по 25 мкл
	PB025M	50Х SYBR Green I , 5 х 0.1 мл DMSO, 1 мл	1000 р-ций по 25 мкл

Число циклов замораживания/размораживания: не более 20.
Транспортировка и хранение: -20 °C в темноте.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год со дня поставки.