Практикум по генной инженерии
Практикум предназначен для студентов 3-4 курса, специализирующихся в области молекулярной биологии, генетики, вирусологии и смежных специальностей, а также для повышения профессионального уровня аспирантов и начинающих исследователей. Практикум подразумевает наличие у учащихся начального опыта работы с ДНК, полимеразной цепной реакцией и клонированием.
Практикум разбит на несколько задач, построенных таким образом, чтобы они моделировали реальное научное исследование. На примере клонирования и экспрессии гена флуоресцентного белка из кораллового полипа рода Clavularia отрабатывается ряд методов, широко применяемых в современной генной инженерии, в том числе выделение суммарной РНК, обратная транскрипция, амплификация кДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР), поиск и клонирование участков интересующего гена с применением вырожденных праймеров, скрининг экспрессионной библиотеки, экспрессия и очистка рекомбинантного белка.
Основные задачи практикума
Задача 1. Выделение суммарной РНК; анализ суммарной РНК на гель-электрофорезе
Задача 2. Синтез кДНК на матрице суммарной РНК
Задача 3. Идентификация 3'- и 5'-концевых фрагментов целевых транскриптов
Задача 4. Амплификация полной кодирующей последовательности гена флуоресцентного белка и его направленное клонирование в бактериальный экспрессионный вектор
Задача 5. Экспрессия гена флуоресцентного белка в бактериях E. coli, визуализация и выделение рекомбинантного белка
Результат работы практикума: культура клеток E. coli экспрессирует ген флуоресцентного белка (Задача 5).
Задачи практикума могут быть выполнены в комплексе (по очереди) или отдельно друг от друга. При недостатке времени, оборудования и т.д. некоторые задачи могут быть исключены из программы практикума. Набор Clavularia FP cloning set (Евроген, кат. # MB001) содержит все необходимые исходные материалы (контрольные образцы), позволяющие осуществить любую из задач без выполнения предыдущих.
Для проведения только отдельных задач практикума выберите необходимые вам наборы из списка продуктов и сформируйте собственный комплект реактивов.
Кроме указанных ниже продуктов для проведения практикума необходимо наличие определенного лабораторного оборудования, расходных материалов и дополнительных реактивов.
| Название | Задачи | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| Комплект для выполнения всех задач практикума | |||||
| Комплект реактивов для проведения практикума по генной инженерии | 5 задач | MBS02 | Для проведения практикума группой до 10 человек | 70 600 | |
| Наборы для выполнения отдельных задач | |||||
| Набор для практикума Clavularia FP cloning set | Для всех задач | MB001 | Для проведения практикума группой до 10 человек | 27 000 | |
| Реагент ExtractRNA | Задача 1 | BC032 | 100 выделений из 100 мг ткани | 7 250 | |
| Набор для синтеза кДНК Mint | Задача 2 | SK001 | 20 реакций объемом 10 мкл | 18 200 | |
| Набор Encyclo Plus PCR kit | Задачи 3, 4 | PK101 | 200 реакций объемом 25 мкл | 7 250 | |
| Cleanup Standard | Задача 4 | BC022S | 50 процедур | 8 950 | |
| Plasmid Miniprep 2.0 | Задача 4 | BC221S | 50 процедур | 8 400 | |
Дополнительные реактивы
| Название | Задачи | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| Маркер длин ДНК 1 kb DNA Ladder | Задачи 1-4 | NL001 | 40 мкг | 2 950 | |
| 4X Gel Loading Dye, Blue буфер | Задачи 1-4 | PB020 | 7.5 мл (5 x 1.5 мл) | 800 | |
| Т4 ДНК-лигаза | Задача 4 | LK101S | 100 реакций | 3 000 | |
| XL1-Blue для химической трансформации | Задачи 4, 5 | CC001 | 10 х 100 мкл | 8 400 |
Хранение и транспортировка: зависит от набора. Режим хранения и транспортировки для каждого набора указан в инструкции.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год со дня поставки.