Практикум

Практикум по генной инженерии

Разработанный компанией Евроген практикум предназначен для студентов 3-4 курса, специализирующихся в области молекулярной биологии, генетики, вирусологии и смежных специальностей, а также для повышения профессионального уровня аспирантов и начинающих исследователей. Практикум подразумевает наличие у учащихся начального опыта работы с ДНК, полимеразной цепной реакцией и клонированием.

Практикум разбит на несколько задач, построенных таким образом, чтобы они моделировали реальное научное исследование. На примере клонирования и экспрессии гена флуоресцентного белка из кораллового полипа рода Clavularia отрабатывается ряд методов, широко применяемых в современной генной инженерии, в том числе выделение суммарной РНК, обратная транскрипция, амплификация кДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР), поиск и клонирование участков интересующего гена с применением вырожденных праймеров, скрининг экспрессионной библиотеки, экспрессия и очистка рекомбинантного белка.

Основные задачи практикума

Задача 1. Выделение суммарной РНК; анализ суммарной РНК на гель-электрофорезе

Задача 2. Синтез кДНК на матрице суммарной РНК

Задача 3. Идентификация 3'- и 5'-концевых фрагментов целевых транскриптов

Задача 4. Амплификация полной кодирующей последовательности гена флуоресцентного белка и его направленное клонирование в бактериальный экспрессионный вектор

Задача 5. Экспрессия гена флуоресцентного белка в бактериях E. coli , визуализация и выделение рекомбинантного белка

	Результат работы практикума: культура клеток E. coli экспрессирует ген флуоресцентного белка (Задача 5).

Подробнее о задачах практикума

Задачи практикума могут быть выполнены в комплексе (по очереди) или отдельно друг от друга. При недостатке времени, оборудования и т.д. некоторые задачи могут быть исключены из программы практикума. Набор Clavularia FP cloning set (Евроген, кат.#MB001) содержит все необходимые исходные материалы (контрольные образцы), позволяющие осуществить любую из задач без выполнения предыдущих.

Для проведения только отдельных задач практикума, выберите необходимые вам наборы из списка продуктов и сформируйте собственный комплект реактивов.

Внимание: Кроме указанных ниже продуктов для проведения практикума необходимо наличие определенного лабораторного оборудования, расходных материалов и дополнительных реактивов.

Оборудование	Востребованность
* Гомогенизатор можно заменить маленькой фарфоровой ступкой или тефлоновым пестиком для микропробирок ** Можно использовать трансиллюминатор или УФ лампу для детекции валюты
Автоматические пипетки-дозаторы на 10-20 мкл, 200 мкл, 1 мл	Все задачи
Настольная центрифуга (для Задачи 1 - желательно с охлаждением на +4°C)	Все задачи
Холодильник с морозильной камерой	Все задачи
УФ трансиллюминатор 295 нм (для визуализации нуклеиновых кислот и белка)	Все задачи
Дистиллятор или источник дистиллированной воды (для фореза)	Все задачи
Вортекс (желательно)	Все задачи
Оборудование для горизонтального гель-электрофореза ДНК: Камера для гель-электрофореза в агарозе Источник постоянного тока Весы Система гель-документации	Задачи 1-4
Амплификатор	Задачи 2-4
Настольный термостат (можно использовать амплификатор)	Задача 1
Гомогенизатор Даунса на 2-3 мл*	Задача 1
Термостат для чашек Петри (шкаф 37°C)	Задачи 4, 5
Газовая или спиртовая горелка	Задачи 4, 5
Шпатель микробиологический (Дригальского)	Задачи 4, 5
Водяная баня с градусником (42°C)	Задачи 4, 5
Термостатическая качалка (37°C)	Задачи 4, 5
Оборудование для детекции флуоресценции: флуоресцентный микроском или бинокуляр с фильтрами FITC и Texas Red (желательно**)	Задачи 4, 5
Ледяная баня (тара со льдом)	Задачи 1, 2
Ультразвуковой гомогенизатор (желательно)	Задача 5

Материал	Востребованность
Количество расходных материалов зависит от числа участников практикума
Наконечники для автоматических пипеток	Все задачи
Стерильные пробирки на 1,5 мл	Все задачи
Пробирки для ПЦР (на 0,2 или 0,5 мл)	Задачи 2-4
Штатив для пробирок	Все задачи
Чашки Петри	Задачи 4, 5
Стерильные культуральные пробирки (10-15 мл)	Задачи 4, 5
Перчатки	Все задачи
Черный и цветные маркеры	Все задачи
Стеклянная колба для плавления агарозы	Задачи 1-4

Реактив, набор реактивов	Востребованность
* 80% этиловый спирт разводят из 96% этилового спирта деионизованной водой ** Компетентные клетки могут быть приготовлены согласно стандартным протоколам (например, сборник "Клонирование ДНК, методы" (Ред. Гловер), Гл. 6, Изд. "Мир", 1988
Реактивы для гель-электрофореза: Агароза 1х Трис-ацетатный буфер (ТАЕ; 40 мМ Трис-ацетат, pH 7,8-8,0; 1 мМ ЭДТА) Концентрированный раствор бромистого этидия (10 мг/мл) Маркер молекулярных длин ДНК (1 kb или 100b DNA ladder) (например, Кат.# NL002, Евроген) Буфер для нанесения проб (10 мМ Трис-HCl, pH 7,8; 0,025% бромфеноловый синий; 0,025% ксиленцианол; 30% глицерин; 25 мМ ЭДТА) (например, Кат.# PB020, Евроген) Дистиллированная вода	Задачи 1-4
Изопропиловый спирт	Задача 1
Хлороформ	Задача 1
80% этиловый спирт*	Задача 1
Минеральное масло для молекулярно-биологических работ или аптечное вазелиновое масло (если амплификатор не имеет нагревающейся крышки)	Задачи 2-4
Компетентные клетки для химической трансформации (XL1-Blue, DH5α или другие recA(-) штаммы) (например, Кат.# СС001, Евроген )**	Задачи 4, 5
ДНК лигаза T4 с 10х буфером (например, Кат.# LK001, Евроген)	Задача 4
Эндонуклеазы рестрикции BamHI и HindIII с соответствующим реакционным буфером, обеспечивающим работу обоих ферментов	Задача 4
LB среда для культивирования бактерий, жидкая и агаризованная на чашках Петри	Задачи 4, 5
Ампициллин (аптечный, сухой, во флаконах)	Задачи 4, 5
Хелатный сорбент для очистки белков с His-мишенью, например, Protino Ni-IDA, Protino Ni-ТЕД (Macherey-Nagel) или NiNTA-agarose (Qiagen)	Задача 5
Раствор EDTA для элюции белка, 100 мМ, рН 8.0	Задача 5
Буфер для озвучивания (50 мМ натрий-фосфатный буфер, рН 7,5-8; 300 мМ NaCl)	Задача 5

ПРОДУКТ	КАТ.#	ЗАДАЧИ	КОЛ-ВО


Комплект для выполнения всех задач практикума
Комплект реактивов для проведения практикума по генной инженерии	MBS02		Для проведения практикума группой до 10 человек
Наборы для выполнения отдельных задач
Набор для практикума Clavularia FP cloning set	MB001	Для всех задач	Для проведения практикума группой до 10 человек
Реагент ExtractRNA*	BC032	Задача 1	на 100 выделений из 100 мг ткани
Набор реактивов Mint для синтеза кДНК	SK001	Задача 2	на 20 р-ций объемом 10 мкл
Набор праймеров Mint RACE primer set	SK004	Задача 3	на 200 р-ций объёмом 25 мкл
Набор реактивов для ПЦР Encyclo Plus PCR kit	PK101	Задачи 3, 4	на 200 р-ций объемом 25 мкл
Набор для выделения и очистки ДНК из геля и реакционных смесей Cleanup Standard	BC022S	Задача 4	на 50 процедур
Набор для выделения плазмидной ДНК Plasmid Miniprep 2.0	BC221S	Задача 4	на 50 процедур

Дополнительные реактивы

ПРОДУКТ	КАТ.#	ЗАДАЧИ	КОЛ-ВО
Цена действительна на территории РФ и не включает доставку, а также не включает затраты на оформление договора для заказов с суммой менее 10 тысяч рублей. Продукты предназначены только для научно-исследовательских работ. Продукты не предназначены для лечения или диагностики заболеваний.
Маркер длин ДНК 100+ bp DNA Ladder	NL002	Задачи 1-4	40 мкг
Gel Loading Dye, Blue буфер	PB020	Задачи 1-4	7.5 мл (5 x 1.5 мл)
Т4 ДНК лигаза	LK001	Задача 4	100 р-ций по 10 мкл
Компетентные клетки XL1-Blue для химической трансформации	CC001	Задачи 4, 5	10 х 100 мкл

Хранение и транспортировка: зависит от набора. Режим хранения и транспортировки для каждого набора указан в инструкции.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год со дня поставки.

Не является публичной офертой
Политика конфиденциальности