Обратная транскриптаза Mint и наборы реактивов
С малых стартовых количеств РНК
кДНК обогащена полноразмерными последовательностями
Обратная транскриптаза Mint — модифицированная ревертаза MMLV. Особенностью Mint является отсутствие активности РНКазы H и способность нематрично присоединять к 3'-концу первой цепи кДНК несколько дезоксинуклеотидов (преимущественно G или C) после завершения синтеза, что позволяет использовать первую цепь для синтеза полноразмерных кДНК библиотек и клонирования 5'-концов кДНК (5'-RACE).
Область применения ревертазы Mint
- Синтез первой цепи кДНК для дальнейшего получения полноразмерных кДНК библиотек.
- Синтез первой цепи кДНК с дальнейшей возможностью амплификации, клонирования и экспрессии.
- Синтез первой цепи кДНК с последующим анализом с помощью ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ).
Наборы Mint kit и Mint kit-2 для синтеза обогащенной полноразмерными последовательностями двухцепочечной кДНК (дц-кДНК) на матрице поли(А) или тотальной РНК.
Принцип действия наборов основан методе синтеза кДНК со сменой матрицы (SMART). Полученная кДНК обогащена полноразмерными последовательностями и содержит известные последовательности адаптеров на обоих концах. Процедура синтеза занимает 6–8 часов. Минимальное стартовое количество РНК для синтеза первой цепи кДНК составляет 250 нг тотальной или 100 нг поли(А) РНК. Для достижения наилучшего результата рекомендуется использовать 1–2 мкг тотальной РНК или 0.5–1 мкг поли(А) РНК.
кДНК, полученная с помощью технологии Mint на основе тотальной РНК из различных источников:
(1) печень мыши;
(2) скелетная мышца мыши;
(3) мозг мыши;
(4) лейкоциты человека;
(5) легкое человека;
(6) скелетная мышца человека;
(7) личинка москита;
(8) копепода Pontella sp.;
(9) помидор Lycopersicon esculentum.
М — маркер 1 kb DNA Ladder.
кДНК, полученная с помощью набора Mint kit, может быть использована для приготовления ненаправленных библиотек кДНК, нормализации с помощью набора реактивов Trimmer-2, быстрой амплификации 3'- и 5'-концевых фрагментов полноразмерных транскриптов (RACE) и других приложений.
Mint kit-2 содержит дополнительные адаптеры, позволяющие приготовить кДНК, оптимальную для последующего секвенирования на платформах Roche/454, ABI/SOLiD или Illumina/Solexa и для направленного клонирования библиотек кДНК.
Хранение и транспортировка: –20 °С.
Срок годности: 12 месяцев с даты поставки при соблюдении условий хранения и транспортировки.
Связанные продукты
| Название | Описание | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| Ферменты | |||||
| ДНКаза Е | Термостойкая эндонуклеаза, разрушающая ДНК до одноцепочечных олигонуклеотидов | EK007S | 100 е.а. | 2 800 | |
| EK007M | 500 е.а. | 11 800 | |||
| Ингибитор РНКаз RiboCare | Ингибитор РНКаз для защиты РНК от деградации РНКазами | EK005S | 50 реакций | 7 000 | |
| EK005M | 250 реакций | 30 200 | |||
| Реактивы для фиксации, выделения и очистки РНК | |||||
| Фиксатор IntactRNA | Фиксатор для стабилизации клеточной РНК в тканях и клеточных культурах (аналог RNAlater) | BC031 | 100 фиксаций по 100 мг ткани | 5 400 | |
| Реагент ExtractRNA | Реагент для выделения суммарной РНК из биологических образцов (аналог TRIzol) | BC032 | 100 выделений из 100 мг ткани | 7 250 | |
| RNA Solo | Набор для выделения суммарной РНК на колонках из клеток и мягких тканей человека и животных, бактерий, дрожжей | BC034T | 10 выделений | 5 300 | |
| BC034S | 50 выделений | 22 600 | |||
| CleanRNA Standard | Набор для очистки препаратов суммарной РНК | BC033S | 25 реакций | 8 100 | |
| BC033M | 100 реакций | 29 900 | |||
| Ревертазы и наборы для синтеза кДНК | |||||
| Magnus | Magnus — генетическая модификация ревертазы MMLV. Термостабильна, не имеет активности РНКазы Н и позволяет получать кДНК длиной до 12 т.п.о. | SK006S | 100 реакций объемом 10 мкл или 50 реакций объемом 20 мкл | 19 100 | |
| SK006M | 500 реакций объемом 10 мкл или 250 реакций объемом 20 мкл | 77 200 | |||
| Набор MMLV RT | Обратная транскриптаза MMLV дикого типа для синтеза первой цепи кДНК с одноцепочечной РНК-матрицы | SK021 | 5000 ед. более 50 реакций | 6 200 | |
| Обратная транскриптаза MMLV | SK022S | 10000 ед. более 100 реакций | 7 700 | ||
| SK022L | 50000 ед. более 500 реакций | 33 900 | |||
| dNTP | |||||
| Смесь dNTP (10 мМ каждого) | Смесь dNTP предназначена для использования в ПЦР, реакциях обратной транскрипции и любых других приложениях, требующих синтеза ДНК | PB006S | 200 мкл, 2 мкмоль | 850 | |
| PB006L | 2 мл (10 x 200 мкл), 20 мкмоль | 6 600 | |||
| Смесь dNTP (2 мМ каждого) | PB032 | 5 мл (5 х 1 мл), 10 мкмоль | 4 850 | ||
| Набор dNTP (100 мМ) | Набор из 4-х пробирок высокоочищенных дезоксинуклеотидов (dATP, dTTP, dGTP, dCTP). Концентрация каждого — 100 мМ | PB033 | 4 х 250 мкл, 25 мкмоль каждого | 5 500 | |
| Раствор dUTP (100 мМ) New | Для использования в ферментативных реакциях синтеза ДНК, где требуется полная или частичная замена dTTP (в том числе для контроля контаминации реакции) | PB034 | 100 мкл, 10 мкмоль | 700 | |
| Вода | |||||
| Вода деионизированная, свободная от нуклеаз | Вода высокой степени очистки | PB207S | 7.5 мл (5 х 1.5 мл) | 450 | |
| PB207M | 50 мл | 2 700 | |||
| PB207L | 1 л | 48 000 | |||
| Буферные растворы | |||||
| 10X Encyclo буфер | Реакционный буфер для работы со смесью полимераз Encyclo | PB010 | 3 мл (5 x 0.6 мл) | 700 | |
| Oligo(dT)15 праймер | Олиго(dT)15 праймер (20 мкМ) для синтеза первой цепи тотальной кДНК | SB001 | 250 мкл (5 x 50 мкл), 5 нмоль | 700 | |
| Random(dN)10 праймер | Случайный декануклеотидный праймер (20 мкМ) для синтеза первой цепи тотальной кДНК | SB002 | 250 мкл (5 x 50 мкл), 5 нмоль | 700 | |
| Буфер для синтеза первой цепи кДНК | 5X буфер для синтеза первой цепи кДНК. Для ревертаз MMLV, Mint и Magnus | SB003 | 1.8 мл | 700 | |
| Раствор DTT (дитиотреитола) | Раствор DTT (концентрация 20 мМ) | SB004 | 1 мл | 700 | |