Синтез и амплификация кДНК "в одной пробирке"
Наборы с возможностью оптимизации реакционной смеси под конкретную задачу
Готовая смесь для рутинной ОТ-ПЦР, без контроля No RT
Проведение обратной транскрипции и ПЦР в одной пробирке позволяет сократить время подготовки и проведения реакции, а также снизить вероятность контаминации за счет уменьшения количества манипуляций с образцом. Одностадийную ОТ-ПЦР чаще всего используют для одновременной обработки большого количества образцов РНК.
Наборы и смесь OneTube можно использовать для решения задач:
- Анализ экспрессии генов,
- Обнаружение и количественная оценка вирусов,
- Количественная оценка РНК или ДНК и т.п.
При одноэтапной стратегии вся синтезирующаяся кДНК попадает в ПЦР и недоступна для других приложений.
Формат наборов OneTube RT-PCR TaqMan и OneTube RT-PCR SYBR предусматривает контроль пробы РНК на присутствие примеси геномной ДНК в реакции без ревертазы. Раздельная комплектация ревертазы и ПЦР-смеси позволяет точечную оптимизацию состава реакционной смеси в зависимости от задачи.
Готовая смесь OneTube RT-PCRmix содержит ревертазу и ПЦР-смесь в одной пробирке. Соотношение компонентов оптимально для рутинной постановки ОТ-ПЦР.
Основные свойства
- Термостабильная ревертаза (55 °С) обладает высокой процессивностью и точностью синтеза кДНК, лишена активности РНКазы H.
- HS Taq ДНК-полимераза "с горячим стартом" обладает 5' → 3' полимеразной и экзонуклеазной активностью.
- Все компоненты оптимизированы для длительного хранения в замороженном виде и допускают до 10 циклов размораживания.
- Детекция накопления ПЦР-продукта происходит в режиме реального времени:
- с использованием флуоресцентных зондов типа TaqMan (набор OneTube RT-PCR TaqMan, смесь OneTube RT-PCRmix);
- с помощью интеркалирующего красителя (набор OneTube RT-PCR SYBR, смесь OneTube RT-PCRmix – при добавлении SYBR Green I).
Преимущества
- Сниженная вероятность контаминации по сравнению с двухстадийным протоколом синтеза кДНК.
- Увеличенная специфичность за счет термостабильной ревертазы и "горячего старта" амплификации.
- В одном анализе могут определяться как РНК-, так и ДНК-мишени. При этом применяется один и тот же протокол ОТ-ПЦР.
- Гибкость при выборе метода детекции амплифицированного продукта: флуоресцентные зонды или интеркалирующие красители.
- Устойчивость к ингибиторам ОТ-ПЦР в концентрациях, характерных для НК, выделенных стандартными методами.
Рекомендации по использованию
- Предназначены для использования с ген-специфичными праймерами.
- Рекомендуемая длина ампликонов — до 300 п.о.
- Рекомендуемое количество РНК на одну реакцию — до 300 нг.
OneTube RT-PCR TaqMan
Результат ОТ-ПЦР фрагмента гена DKC с помощью набора OneTube RT-PCR TaqMan.
Матрица – последовательные разведения тотальной РНК человека в 4 раза (от 450 нг до 110 пг на старт реакции).
А – график нарастания флуоресценции при амплификации.
Б – калибровочный график.
OneTube RT-PCR SYBR
Результат ОТ-ПЦР фрагмента гена β2M с помощью набора OneTube RT-PCR SYBR.
Матрица – последовательные разведения тотальной РНК человека в 10 раз (от 100 нг до 10 пг на старт реакции).
А – график нарастания флуоресценции при амплификации.
Б – калибровочный график.
| Название | Ревертаза и полимераза | Способ детекции | Инструкция | Кат. # | Количество реакций | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Набор OneTube RT-PCR TaqMan | В отдельных пробирках | Флуоресцентные зонды типа TaqMan | SK031S | 100 | 10 800 | |
| SK031M | 500 | 50 900 | ||||
| Набор OneTube RT-PCR SYBR | Интеркалирующий краситель SYBR Green I (входит в состав смеси) | SK032S | 100 | 10 800 | ||
| SK032M | 500 | 50 900 | ||||
| Смесь OneTube RT-PCRmix | В одной пробирке | Флуоресцентные зонды типа TaqMan или интеркалирующие красители | SK101S | 100 | 9 500 | |
| SK101M | 500 | 46 100 |
Хранение и транспортировка: –20 °С, не более 10 циклов замораживания.
Срок годности: 12 месяцев с даты поставки при соблюдении условий хранения и транспортировки.
Связанные продукты
| Название | Описание | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| Ферменты | |||||
| ДНКаза Е | Термостойкая эндонуклеаза, разрушающая ДНК до одноцепочечных олигонуклеотидов | EK007S | 100 е.а. | 2 800 | |
| EK007M | 500 е.а. | 11 800 | |||
| Ингибитор РНКаз RiboCare | Ингибитор РНКаз для защиты РНК от деградации РНКазами | EK005S | 50 реакций | 7 000 | |
| EK005M | 250 реакций | 30 200 | |||
| Реактивы для фиксации, выделения и очистки РНК | |||||
| Фиксатор IntactRNA | Фиксатор для стабилизации клеточной РНК в тканях и клеточных культурах (аналог RNAlater) | BC031 | 100 фиксаций по 100 мг ткани | 5 400 | |
| Реагент ExtractRNA | Реагент для выделения суммарной РНК из биологических образцов (аналог TRIzol) | BC032 | 100 выделений из 100 мг ткани | 7 250 | |
| RNA Solo | Набор для выделения суммарной РНК на колонках из клеток и мягких тканей человека и животных, бактерий, дрожжей | BC034T | 10 выделений | 5 300 | |
| BC034S | 50 выделений | 22 600 | |||
| CleanRNA Standard | Набор для очистки препаратов суммарной РНК | BC033S | 25 реакций | 8 100 | |
| BC033M | 100 реакций | 29 900 | |||
| Ревертазы и наборы для синтеза кДНК | |||||
| Набор MMLV RT | Обратная транскриптаза MMLV дикого типа для синтеза первой цепи кДНК с одноцепочечной РНК-матрицы | SK021 | 5000 ед. более 50 реакций | 6 200 | |
| Обратная транскриптаза MMLV | SK022S | 10 000 ед. более 100 реакций | 7 700 | ||
| SK022L | 50 000 ед. более 500 реакций | 33 900 | |||
| Набор для синтеза кДНК Mint | Mint – генетическая модификация ревертазы MMLV. Предназначена для приготовления амплифицированных библиотек кДНК,обогащенных полноразмерными кодирующими последовательностями | SK001 | 20 реакций по 10 мкл | 18 200 | |
| Набор для синтеза кДНК Mint-2 | SK005 | 19 800 | |||
| Обратная транскриптаза Mint | SK003 | 20 000 ед. 100 реакций по 10 мкл или 50 реакций по 20 мкл | 18 800 | ||