Фотосенсибилизатор KillerRed
Генетически-кодируемый фотосенсибилизатор
Активация зеленым или оранжевым светом
Фотосенсибилизаторы - вещества, способные производить активные формы кислорода (АФК) при облучении светом. KillerRed и его производные (например, KillerOrange) - единственные известные сегодня генетически кодируемые фотосенсибилизаторы, которые могут быть непосредственно экспрессированы в клетках-мишенях и созревать без добавления экзогенных компонентов.
KillerRed – димерный флуоресцентный белок, обладающий красной флуоресценцией (максимумы возбуждения и эмиссии при 585 и 610 нм, соответственно). Он не проявляет токсических свойств до активации зеленым или оранжевым светом. После облучения светом с длиной волны 540-590 нм KillerRed образует АФК, которые повреждают близлежащие молекулы, и утрачивает способность к флуоресценции.
KillerRed может быть использован для избирательного светоиндуцируемого уничтожения клеток. Тип клеточной гибели зависит от внутриклеточной локализации фотосенсибилизатора, а также интенсивности и длительности облучения. В случае митохондриальной локализации фотосенсибилизатора преимущественно развивается апоптоз, в случае мембранной – некроз (Bulina et al., 2006a; 2006b).
KillerRed также может быть использован для селективной инактивации слитого с ним белка (технология CALI, chromophore-assisted light inactivation). Он может непосредственно быть слит с некоторыми белками-мишенями (например, β-актином, фибрилларином, транспортером дофамина, Tau-34 и др.). Для тех мишеней, у которых может произойти нарушение функций вследствие димеризации фотосенсибилизатора, KillerRed рекомендуется использовать в виде тандемного варианта. В таком случае он не нарушает работу слитых с ним мишеней; например, слитый с гистоном H2B тандемный вариант KillerRed (ArrestRed) позволяет влиять на клеточный цикл при облучении светом (Serebrovskaya et al., 2011).
Таблица основных свойств
ХАРАКТЕРИСТИКИ * Яркость – произведение коэффициента молярной экстинкции и квантового выхода флуоресценции, деленое на 1000.
Молекулярная масса, кДа 27 Длина полипептидной цепи, аминокислот 239 Структура димер Агрегация в клетках нет Скорость созревания при 37°C высокая Активирующий свет зеленый или оранжевый (540-590 нм) Цвет флуоресценции красный Максимум возбуждения, нм 585 Максимум эмиссии, нм 610 Квантовый выход 0.25 Коэффициент молярной экстинкции, M-1см-1 45 000 Яркость* 11.3
Список продуктов
| Название | Описание | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| pKillerRed-N вектор | Вектор для экспрессии KillerRed в клетках млекопитающих под контролем CMV-промотора, содержит полилинкер (MCS) на 5'- конце кодирующей последовательности KillerRed | FP962 | 20 мкг | 17 4008 700 | |
| pKillerRed-B вектор | Вектор для экспрессии KillerRed в клетках прокариот | FP963 | 20 мкг | 17 4008 700 | |
| pKillerRed-mem вектор | Вектор для экспрессии KillerRed, слитого с сигналом локализации на мембране, в клетках млекопитающих под контролем CMV-промотора. Активация KillerRed, локализованного на мембране, приводит к гибели клеток в следствие разрушения липидного слоя | FP966 | 20 мкг | 17 4008 700 | |
| Антитела Anti-KillerRed | Поликлональные антитела кролика к белкам KillerRed, KillerOrange, ArrestRed и JRed | AB961 | 100 мкг | 12 400 |
Список литературы
- Bulina ME, Chudakov DM, Britanova OV, Yanushevich YG, Staroverov DB, Chepurnykh TV, Merzlyak EM, Shkrob MA, Lukyanov S, Lukyanov KA.
A genetically encoded photosensitizer.
Nat Biotechnol. 2006a; 24 (1):95-9
pmid: 16369538 - Bulina ME, Lukyanov KA, Britanova OV, Onichtchouk D, Lukyanov S, Chudakov DM.
Chromophore-assisted light inactivation (CALI) using the phototoxic fluorescent protein KillerRed.
Nat Protoc. 2006b; 1 (2):947-53
pmid: 17406328 - Serebrovskaya EO, Gorodnicheva TV, Ermakova GV, Solovieva EA, Sharonov GV, Zagaynova EV, Chudakov DM, Lukyanov S, Zaraisky AG, Lukyanov KA.
Light-induced blockage of cell division with a chromatin-targeted phototoxic fluorescent protein.
Biochem J. 2011; [Epub ahead of print]
pmid: 21214518 doi: 10.1042/BJ20101217