Дуплекс-специфическая
нуклеаза
- Специфически гидролизует двухцепочечную ДНК
- Термостабильна
- Устойчива к протеиназе К
 | Дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) очищена из гепатопанкреаса камчатского краба с помощью модифицированного протокола, описанного Шагиным и соавт. (Shagin et al., 2002). ДСН – термостабильная нуклеаза, обладающая специфичностью к двухцепочечной (дц) ДНК. ДСН проявляет гидролитическую активность в присутствии ионов двухвалентных металлов (например, Mg2+). ДСН может быть использована для удаления двухцепочечной ДНК из сложных смесей нуклеиновых кислот, например при нормализации образцов кДНК (Zjulidov et al., 2004; 2005) или при определении длины выступающих теломерных концов (Zhao et al., 2008). |
| КАТ.# | КОМПОНЕНТЫ НАБОРА | ЦЕНА, РУБ. | ИНСТРУКЦИЯ (PDF) | |
|---|---|---|---|---|
| EA001 | 50 ед. Куница | Лиофилизированная дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) Буфер для хранения ДСН, 100 мкл 10Х ДСН буфер, 100 мкл ДСН стоп-раствор, 500 мкл Контрольная плазмидная ДНК (0.1 мкг/мл), 20 мкл |  | |
| EA002 | 100 ед. Куница | |||
| EA003 | 10 ед. Куница | |||
Цена действительна на территории РФ и не включает доставку, а также не включает затраты на оформление договора для
заказов с суммой менее 10 тысяч рублей. Продукты предназначены только для научно-исследовательских работ. Продукты
не предназначены для лечения или диагностики заболеваний.
| ||||
Хранение: -20 °C.
Транспортировка: комнатная температура.
Срок годности: 12 месяцев с даты поставки при соблюдении условий хранения и транспортировки.
Измерение активности: Активность ДСН измеряют с помощью модифицированного метода Куница ( Kunitz, 1950), где за единицу активности принимают количество фермента, которое при добавлении к 50 мкг/мл ДНК из тимуса теленка приводит к увеличению абсорбции раствора на 0.001 единицу за минуту. Измерение активности проводят при 25 °C в 50 мМ Tris-HCl буфере (pH 7.15), содержащем 5 мМ MgCl2.
Основные свойства ДСН
-
1. Mg2+-зависимая нуклеаза, необходимая концентрация ионов магния для большинства приложений – 5 мМ.
Ингибируется в присутствии ЭДТА.
2. Субстратная специфичность: ДНК в ДНК-ДНК (минимальная длина спаренной последовательности субстрата – 9-10 п.о.) и ДНК-РНК гибридах (минимальная длина спаренной последовательности субстрата – 15-20 п.о.)
3. Температурный оптимум: 55-65 °С
4. pH оптимум: 7-8
5. pH стабильность: от 4 до 12
6. Устойчива к обработке протеиназой К при 37 °С
7. Температурная стабильность:
| ||||||||||||
 | Действие ДСН на оц- (ДНК фага M13) и дц- (ДНК фага λ) ДНК-субстраты.1, 2 – отрицательный контроль, инкубация ДНК в отсутствие ДСН: (1) ДНК фага M13; (2) смесь ДНК фага M13 и ДНК фага λ. 3, 4 – инкубация смеси ДНК фага M13 и ДНК фага λ в присутствии ДСН при 70 °C в течение 1.5 мин (3) и 5 мин (4). |
|---|
Список литературы:
- Kunitz M. Crystalline desoxyribonuclease; digestion of thymus nucleic acid; the kinetics of the reaction. J Gen Physiol. 1950; 33 :363-377. / pmid: 15406374
- Shagin DA, Rebrikov DV, Kozhemyako VB, Altshuler IM, Shcheglov AS, Zhulidov PA, Bogdanova EA, Staroverov DB, Rasskazov VA, Lukyanov S. A novel method for SNP detection using a new duplex-specific nuclease from crab hepatopancreas. Genome Res. 2002; 12 (12):1935-42. / pmid: 12466298
- Zhao Y, Hoshiyama H, Shay JW, Wright WE. Quantitative telomeric overhang determination using a double-strand specific nuclease. Nucleic Acids Res. 2008; 36 (3):e14. / pmid: 18073199
- Zhulidov PA, Bogdanova EA, Shcheglov AS, Shagina IA, Wagner LL, Khazpekov GL, Kozhemyako VV, Lukyanov SA, Shagin DA. A method for the preparation of normalized cDNA libraries enriched with full-length sequences. Bioorg Khim. 2005; 31 (2):186-94. / pmid: 15889793
- Zhulidov PA, Bogdanova EA, Shcheglov AS, Vagner LL, Khaspekov GL, Kozhemyako VB, Matz MV, Meleshkevitch E, Moroz LL, Lukyanov SA, Shagin DA. Simple cDNA normalization using kamchatka crab duplex-specific nuclease. Nucleic Acids Res. 2004; 32 (3):e37. / pmid: 14973331
