Evrogen

Дуплекс-специфическая нуклеаза

  • Специфически гидролизует двухцепочечную ДНК

  • Термостабильна

  • Устойчива к протеиназе К

Дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) очищена из гепатопанкреаса камчатского краба с помощью модифицированного протокола, описанного Шагиным и соавт. (Shagin et al., 2002). ДСН – термостабильная нуклеаза, обладающая специфичностью к двухцепочечной (дц) ДНК. ДСН проявляет гидролитическую активность в присутствии ионов двухвалентных металлов (например, Mg2+).

ДСН может быть использована для удаления двухцепочечной ДНК из сложных смесей нуклеиновых кислот, например при нормализации образцов кДНК (Zjulidov et al., 2004; 2005) или при определении длины выступающих теломерных концов (Zhao et al., 2008).

НазваниеИнструкцияКат. #КоличествоЦена, руб.
Дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН)PDFEA001

50 ед. Куница

30 000
EA002

100 ед. Куница

42 400
EA003

10 ед. Куница

9 900

Хранение: –20 °C.
Транспортировка: комнатная температура.
Срок годности: 12 месяцев с даты поставки при соблюдении условий хранения и транспортировки.

Измерение активности: Активность ДСН измеряют с помощью модифицированного метода Куница ( Kunitz, 1950), где за единицу активности принимают количество фермента, которое при добавлении к 50 мкг/мл ДНК из тимуса теленка приводит к увеличению абсорбции раствора на 0.001 единицу за минуту. Измерение активности проводят при 25 °C в 50 мМ Tris-HCl буфере (pH 7.15), содержащем 5 мМ MgCl2.

Основные свойства ДСН

  1. Mg2+-зависимая нуклеаза, необходимая концентрация ионов магния для большинства приложений – 5 мМ. Ингибируется в присутствии ЭДТА.
  2. Субстратная специфичность: ДНК в ДНК-ДНК (минимальная длина спаренной последовательности субстрата – 9-10 п.о.) и ДНК-РНК гибридах (минимальная длина спаренной последовательности субстрата – 15-20 п.о.)
  3. Температурный оптимум: 55–65 °С
  4. pH оптимум: 7-8
  5. pH стабильность: от 4 до 12
  6. Устойчива к обработке протеиназой К при 37 °С
  7. Температурная стабильность:

Температура

Остаточная активность*, %

60 °С

100

70 °С

60

80 °С

40

90 °С

меньше 10

* Остаточная активность после 30-мин прогревания

Действие ДСН на оц- (ДНК фага M13) и дц- (ДНК фага λ) ДНК-субстраты.

1, 2 – отрицательный контроль, инкубация ДНК в отсутствие ДСН:
    (1) ДНК фага M13
    (2) смесь ДНК фага M13 и ДНК фага λ
3, 4 – инкубация смеси ДНК фага M13 и ДНК фага λ в присутствии ДСН при 70 °C в течение 1.5 мин (3) и 5 мин (4)

Список литературы

  • Kunitz M.
    Crystalline desoxyribonuclease; digestion of thymus nucleic acid; the kinetics of the reaction.
    J Gen Physiol. 1950; 33 :363-377
    pmid: 15406374 doi: 10.1085/jgp.33.4.363
  • Shagin DA, Rebrikov DV, Kozhemyako VB, Altshuler IM, Shcheglov AS, Zhulidov PA, Bogdanova EA, Staroverov DB, Rasskazov VA, Lukyanov S.
    A novel method for SNP detection using a new duplex-specific nuclease from crab hepatopancreas.
    Genome Res. 2002; 12 (12):1935-42
    pmid: 12466298
  • Zhao Y, Hoshiyama H, Shay JW, Wright WE.
    Quantitative telomeric overhang determination using a double-strand specific nuclease.
    Nucleic Acids Res. 2008; 36 (3):e14
    pmid: 18073199
  • Zhulidov PA, Bogdanova EA, Shcheglov AS, Shagina IA, Wagner LL, Khazpekov GL, Kozhemyako VV, Lukyanov SA, Shagin DA.
    A method for the preparation of normalized cDNA libraries enriched with full-length sequences.
    Bioorg Khim. 2005; 31 (2):186-94
    pmid: 15889793
  • Zhulidov PA, Bogdanova EA, Shcheglov AS, Vagner LL, Khaspekov GL, Kozhemyako VB, Matz MV, Meleshkevitch E, Moroz LL, Lukyanov SA, Shagin DA.
    Simple cDNA normalization using kamchatka crab duplex-specific nuclease.
    Nucleic Acids Res. 2004; 32 (3):e37
    pmid: 14973331