Прямая ПЦР (Direct PCR)
Прямая ПЦР (Direct PCR) — метод амплификации ДНК из биологического материала без предварительного выделения и очистки нуклеиновых кислот. Метод позволяет использовать образец в реакции практически сразу после получения, снижая требования к пробоподготовке и сокращая время анализа.
ПЦР с цельной крови и лейкоцитарной фракции
Direct PCR применяется для амплификации ДНК непосредственно из крови и лейкоцитарной фракции млекопитающих, минуя этап выделения и очистки ДНК.
Эффективность амплификации обеспечивается:
InBlood ДНК-полимеразой. Фермент обладает высокой устойчивостью к ингибирующим компонентам крови, включая гемоглобин, лактоферрин, иммуноглобулины, полисахариды, фенольные соединения;
Буфером InBlood, способствующим разрушению клеточных мембран.
Преимущества метода
- Упрощение работы с большим количеством образцов
- Сокращение времени анализа за счет исключения этапа выделения ДНК
- Уменьшение расхода реактивов и материалов, необходимых для пробоподготовки
- Снижение риска контаминации и потери образца благодаря уменьшению количества этапов работы
Способы детекции ПЦР-продукта
Амплификация с последующим анализом ПЦР-продукта с помощью гель-электрофореза:
Результат ПЦР амплификации образцов крови и лейкоцитов с помощью InBlood ДНК-полимеразы
М — DNA Ladder 1 kb;
(1) — кровь с ЭДТА, 10% биоматериала на реакцию;
(2) — кровь с цитратом натрия, 5% биоматериала на реакцию;
(3) — кровь с гепарином, 2% биоматериала на реакцию;
(4) — лейкоциты из крови с ЭДТА, 4% биоматериала на реакцию;
(5) — лейкоциты из крови с цитратом натрия, 4% биоматериала на реакцию;
(6) — лейкоциты из крови с гепарином, 4% биоматериала на реакцию.
Лейкоциты получены с помощью протокола 3
"Рекомендации по получению лейкоцитарной фракции из крови млекопитающих".
ПЦР-РВ с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green I:
Результат амплификации образцов крови человека с разными антикоагулянтами (ЭДТА – фиолетовым; цитрат натрия – красным; гепарин – синим) с использованием готовой смеси 5X InBlood PCRmix-HS SYBR с интеркалирующим красителем SYBR Green I.
Слева представлен график амплификации;
Cправа — график плавления ПЦР-продукта.
ПЦР-РВ с флуоресцентными зондами (TaqMan пробы):
Детекция полиморфизма гена SLCO1B1 методом ПЦР-РВ в цельной крови (антикоагулянт ЭДТА) с использованием готовой смеси 5X InBlood PCRmix-HS.
Слева результат амплификации Донора 1 — гомозигота по аллели 1 (флуоресценция по каналу FAM);
Справа результат амплификации Донора 2 — гетерозигота (флуоресценция по каналам FAM и HEX).
Связанные продукты
| Название | Описание | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| InBlood ДНК-полимераза New | Для амплификации с цельной кровью и лейкоцитами без предварительного выделения ДНК | PK132S | 200 реакций по 50 мкл | 24 400 | |
| PK132L | 1 000 реакций по 50 мкл | 92 100 | |||
| PK132B | 92 100 | ||||
| 5X InBlood PCRmix-HS New | Для ПЦР и ПЦР-РВ с цельной кровью без предварительного выделения ДНК | PK332S | 100 | 14 700 | |
| PK332L | 1 000 | 124 900 | |||
| PK332B | 24 980 | ||||
| 5X InBlood PCRmix-HS SYBR New | Для ПЦР-РВ с цельной кровью без предварительного выделения ДНК | PK333S | 100 | 15 000 | |
| PK333L | 1 000 | 127 500 | |||
| PK333B | 25 500 |