Антитела Anti-tRFP
Распознают 15 красных и синих флуоресцентных белков: TagRFP, TurboRFP, FusionRed, mKate2, mCherry, TagBFP и другие
Вестерн-блот, иммуноблоттинг, иммуноцитохимия и ИФА
Специфические IgG кролика, очищенные аффинной хроматографией
Поликлональные антитела кролика против TurboRFP, TurboFP602, TurboFP635, Katushka2S, TurboFP650, NirFP, TagBFP, TagBFP2, TagRFP, FusionRed, TagFP635, mKate2, PA-TagRFP, mRuby и mCherry.
Специфичность: антитела отобраны по способности распознавать денатурированный и нативный TagRFP. Антитела распознают также TurboRFP, TurboFP602, TurboFP635, Katushka2S, TurboFP650, NirFP, TagBFP, TagBFP2, FusionRed, TagFP635, mKate2, PA-TagRFP, mRuby и mCherry.
Детекция флуоресцентных белков вестерн-блотом с антителами Anti-tRFP.
Лизаты клеток HEK293, экспрессирующих флуоресцентные белки, перед нанесением прогревали в буфере для образцов (95 °C, 10 мин). Концентрация антител Anti-tRFP — 0,6 мкг/мл. Вторичные антитела — антитела козы против IgG кролика, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Примечание. При прогреве образцов красные флуоресцентные белки с DsRed-подобным хромофором часто частично фрагментируются: связь рвется непосредственно перед хромофором. Поэтому на вестерн-блоте видно несколько полос — они соответствуют укороченным и частично укороченным формам белков.
Применение
- Вестерн-блот
- Иммуноблоттинг
- Иммуноцитохимия (ICC)
- ИФА (ELISA)
Антитела используются для детекции TurboRFP, TurboFP602, TurboFP635, Katushka2S, TurboFP650, NirFP, TagBFP, TagBFP2, TagRFP, FusionRed, TagFP635, mKate2, PA-TagRFP, mRuby и mCherry и их слитых белков. Антитела подходят также для детекции Dendra2 вестерн-блотом.
Рабочие разведения:
- вестерн-блот — 1:1 000 – 1:5 000
- ИФА — 1:30 000 – 1:50 000
- иммуноцитохимия — 1:1 000 – 1:3 000
Оптимальные разведения и концентрации подбираются пользователем.
| Название | Описание | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| Антитела Anti-tRFP | Поликлональные антитела кролика к белкам TurboRFP, TurboFP602, TurboFP635, Katushka2S, TurboFP650, NirFP, TagBFP, TagRFP, FusionRed, TagFP635, mKate2 и PA-TagRFP | AB233 | 100 мкг | 12 400 |
Получение
Иммуноген: полноразмерные рекомбинантные TagRFP и TurboFP635, денатурированные и нативные, и полноразмерные рекомбинантные нативные TagBFP и FusionRed.
Полноразмерные рекомбинантные TagRFP, TagBFP, FusionRed и TurboFP635 выделены из трансформированных E. coli органической экстракцией и ионообменной хроматографией.
Антитела получены иммунизацией кроликов смесью денатурированного и нативного TagRFP, смесью денатурированного и нативного TurboFP635, нативным TagBFP и нативным FusionRed. Специфические IgG очищены аффинной хроматографией на TagRFP, TurboFP635, TagBFP и FusionRed, смешаны и лиофилизированы.
Форма поставки и хранение
Форма поставки: лиофилизат из буфера PBS с 0,5 % трегалозы, pH 7,4.
Восстановление: стерильной водой или 50 % глицерином до концентрации 1 мг/мл.
Транспортировка: при комнатной температуре.
Хранение:
- Лиофилизированные антитела стабильны 12 месяцев с даты получения при хранении при −20 °C. Желательно хранить с осушителем (силикагелем).
- Антитела, восстановленные стерильной водой, хранятся 3 месяца при +2…+8 °C без заметной потери активности.
- Антитела, восстановленные 50 % глицерином, хранятся 6 месяцев при −20 °C в морозильнике без автоматической разморозки без заметной потери активности.
- После восстановления разделите антитела на аликвоты, избегайте повторного замораживания и оттаивания.
Подготовка образцов
Подготовка образцов для вестерн-блота. К образцу, содержащему 10–100 нг белка-мишени, добавьте равный объем 2× буфера для образцов SDS-PAGE. Перед нанесением на гель или на мембрану (дот-блот) прогрейте образец при 95 °C.
Фиксация тканей (клеток) для иммуногистохимии. Рекомендуется фиксация формальдегидом (формалин, параформ). Например, ткань фиксируют в PBS с 4 % формальдегида 10–15 мин, обрабатывают 0,1 % сапонином в PBS 10–15 мин и трижды промывают PBS.