MycoReport
Набор для выявления контаминации микоплазмой культур клеток методом ПЦР
Возможен анализ культуральной жидкости без выделения ДНК
Содержит фермент УДГ для предотвращения контаминации и исключения ложноположительных результатов
Включает контроль для выявления присутствия ингибиторов реакции
Время анализа: от 2.5 часов
Набор реактивов MycoReport позволяет надежно проверить культуры клеток на наличие микоплазменной контаминации методом ПЦР с анализом на агарозном геле. Структура праймеров позволяет гарантированно обнаружить геномную ДНК шести видов микроорганизмов, которые составляют около 95% случаев микоплазменных инфекций культур клеток - Mycoplasma orale, M.arginini, M. fermentans, M. hominis, M. hyorhinis и Acholeplasma laidlawii. Набор подходит для регулярного скрининга клеточных линий.
Биологический материал
- Культуральная жидкость клеток
- ДНК, выделенная из культуры клеток
Для выделения ДНК из клеточных культур можно воспользоваться набором ExtractDNA Blood.
Метод
ПЦР по конечной точке – амплификация видоспецифичных участков генов 16S рРНК микроорганизмов с последующей электрофоретической детекцией.
Риск получения ложноположительных результатов снижен благодаря присутствию УДГ (урацил-ДНК-гликозилазы). Этот фермент расщепляет ПЦР-продукты, полученные в предыдущих постановках (в случае их попадания в реакционную смесь).
Риск ложноотрицательных результатов снижен благодаря наличию положительного контрольного образца (ПКО) и реакции с внутренним контролем. Реакции с ПКО позволяют убедиться в сохранности компонентов набора. Реакция с внутренним контролем показывает наличие или отсутствие ингибиторов ПЦР, которые могут быть причиной не прохождения основной реакции.
Анализ результата
Качественный анализ по наличию/отсутствию целевого ПЦР-продукта в агарозном геле, размер ампликона 516-519 п.о. (в зависимости от вида)
Пример электрофореграммы ПЦР-продуктов в агарозном геле (ТАЕ, 1% агарозы) при нанесении по 3 мкл реакционной смеси.
По результатам проверки в образце из линии клеток HEK 293 выявлена контаминация микоплазмой.
M – Маркер длин ДНК DNA Ladder 100 bp;
NTC – контроль без матрицы;
ПКО – положительный контрольный образец;
HeLa – исследуемый образец линии клеток HeLa;
HEK – исследуемый образец линии клеток HEK 293;
Смесь MR – специфическая реакция на наличие микоплазмы;
Смесь МС – реакция внутреннего контроля.
Аналитическая чувствительность
- от 25 копий ДНК микоплазмы при анализе культуральной жидкости
- от 50 копий микоплазмы при анализе геномной ДНК, выделенной из культуры клеток
Количество исследуемых образцов
От 16 до 46 в зависимости от формата постановки.
| Название | Компоненты набора | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| Набор MycoReport | 5x ПЦР-смесь MycoReport, 500 мкл | MR001 | не менее 16 образцов | 18 100 |
Хранение и транспортировка: –20 °С, не более 10 циклов замораживания-размораживания.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год со дня поставки.