Флуоресцентные белки: группа TurboColors
Группа TurboColors объединяет белки, обладающие высоким уровнем флуоресценции, скорость созревания которых при 37 °С превосходит скорость созревания остальных флуоресцентных маркеров, доступных на рынке. Эти белки идеально подходят для анализа активности промоторов в живых клетках. Для анализа быстротечных изменений в активности промоторов мы рекомендуем использовать дестабилизированные версии флуоресцентных белков (-dest1), содержащие специфическую последовательность, обеспечивающую быструю деградацию белка в клетке.
Благодаря высокой интенсивности флуоресценции, белки группы TurboColors очень удобны для мечения клеток (например, при анализе эффективности трансфекции). Несмотря на склонность к образованию димеров, белки этой группы могут быть сшиты с сигналами внутриклеточной локализации для направления их в определенные клеточные структуры. TurboFP635 - белок, обладающий флуоресценцией в дальне-красной области спектра, рекомендуется для мечения клеток внутри целых организмов.
Спектральное разнообразие
Нормализованные спектры возбуждения и эмиссии белков группы TurboColors.
Таблица основных свойств белков группы TurboColors
Белок | |||||
|---|---|---|---|---|---|
Цвет флуоресценции | зеленый | желтый | оранжево-красный | красный | дальне-красный |
Максимум возбуждения (нм) | 482 | 525 | 553 | 574 | 588 |
Максимум эмиссии (нм) | 502 | 538 | 574 | 602 | 635 |
Квантовый выход | 0.53 | 0.53 | 0.67 | 0.35 | 0.34 |
К экст. (M-1cm-1) | 70 000 | 105 000 | 92 000 | 74 000 | 65 000 |
Яркость* | 37.1 | 55.7 | 61.6 | 26.0 | 22.1 |
Яркость, % от EGFP | 112 | 169 | 187 | 79 | 67 |
Фотостабильность | высокая | высокая | высокая | высокая | высокая |
pKa | 5.2 | 5.9 | 4.4 | 4.7 | 5.5 |
Структура | димер | димер | димер | димер | димер |
Токсичность для клеток | нет | при высоких конц. | нет | нет | нет |
Агрегация | нет | при высоких конц. | нет | нет | нет |
Скорость созревания при 37°C | очень быстрая | очень быстрая | очень быстрая | быстрая | очень быстрая |
Молекулярный вес (кДа) | 26 | 26 | 26 | 26 | 26 |
* Яркость – произведение коэффициента молярной экстинкции и квантового выхода флуоресценции, деленое на 1000.
К экст. – коэффициент молярной экстинкции.
Примеры использования
Высокая скорость созревания белков группы TurboColors приводит к более раннему возникновению флуоресцентного сигнала, что позволяет использовать эти белки для анализа активности ранних промоторов.
Сравнение скорости созревания EGFP и TurboGFP в развивающемся зародыше Xenopus laevis.
Векторы для экспрессии флуоресцентных белков под контролем CMV промотора были инъецированы в анимальное поле эмбрионов на стадии двух бластомеров. Флуоресцентный сигнал TurboGFP был детектирован уже на стадии средней гаструлы, сразу после активации генной экспрессии в эмбрионах.
Белки группы TurboColors были протестированы в качестве партнеров слияния с сигналами внутриклеточной локализации и с рядом олигомеризующихся клеточных белков, а также при создании стабильно трансфецированных клеточных линий.
Стабильно трансфецированные линии клеток, экспрессирующие белки группы TurboColors.
PhiYFP(m) - варианты TurboYFP, имеющие сходные спектры флуоресценции, но несколько меньшую скорость созревания и яркость. Эти варианты не образуют агрегатов и не проявляют токсичности при высоких концентрациях. Fib - фиблилларин, peroxi - сигнал локализации в пероксисомах, mito - сигнал локализации в митохондриях