Векторы для клонирования pAL2-T и pKAN-T
Быстрое клонирование продуктов ПЦР
Высокая эффективность клонирования
Векторы pAL2-T и pKAN-T предназначены для клонирования продуктов ПЦР без предварительной обработки рестриктазами или экзонуклеазами.
Рекомендуемый размер вставки — до 1 000 п.о.
Каждый из векторов представляет собой линеаризованную плазмиду с выступающими фосфорилированными 3'-концевыми тимидинами. Эффективное лигирование ПЦР-продукта в вектор основано на способности Таq-полимеразы и ее аналогов нематрично добавлять на 3'-конец синтезированной цепи ДНК дезоксиаденозин. Таким образом, продукт ПЦР и вектор несут выступающие комплементарные 3'-концевые нуклеотиды А:Т. Наличие таких "липких" концов обеспечивает значительно более высокую эффективность лигирования по сравнению с лигированием "втупую".
Векторы несут гены устойчивости к антибиотикам:
- pAL2-T – к ампициллину;
- pKAN-T – к канамицину.
Различная устойчивость существенно облегчает переклонирование ампликонов и последующую работу с клонированными фрагментами ДНК. Возможность смены устойчивости к антибиотику (ампициллин на канамицин, и наоборот) позволяет исключить возможность роста колоний с исходной плазмидой, что упрощает манипуляции при переклонировании фрагментов из ТА-векторов в специализированные вектора. Отказ от обязательной в ряде случаев и трудоемкой стадии очистки продуктов ПЦР/рестрикции через агарозный гель сокращает время клонирования и уменьшает потери ДНК.
Основные свойства векторов pAL2-T и pKAN-T
- Клонирование ПЦР-продуктов в вектор не требует дополнительной ферментативной обработки;
- Вектор обеспечивает возможность бело-голубой селекции клонов (по результатам ПЦР-скрининга не менее 90% белых колоний содержат рекомбинантную плазмидную ДНК);
- Вектор можно использовать для клонирования как индивидуальных ампликонов, так и сложных смесей (например, амплифицированных библиотек кДНК);
- Возможен отбор рекомбинантных клонов путем ПЦР-скрининга бактериальных колоний с использованием стандартной пары праймеров;
- Растворенный в воде вектор выдерживает не менее 10-15 циклов размораживания/замораживания без снижения эффективности клонирования.
A - Карта pAL2-T вектора, 3 005 п.о.
Б - Карта pKAN-T вектора, 2 940 п.о.
Хранение: –20 °С.
Транспортировка: комнатная температура.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год со дня поставки.
Связанные продукты
| Название | Описание | Инструкция | Кат. # | Количество | Цена, руб. |
|---|---|---|---|---|---|
| Клонирование ДНК | |||||
| Набор для клонирования Quick-TA kit | Набор для быстрого клонирования продуктов ПЦР | TAK02 | 50 реакций | 10 800 | |
| Т4 ДНК-лигаза | Рекомбинантная T4 ДНК-лигаза для лигирования ДНК-вставки в плазмиду, линкерных адаптеров, сшивки одноцепочечного разрыва ДНК и циклизации линейной ДНК | LK101S | 100 реакций | 3 000 | |
| LK101L | 500 реакций | 12 300 | |||
| Компетентные клетки | |||||
| Выделение и очистка ДНК | |||||
| Cleanup Standard | Наборы для очистки ДНК из агарозного геля и реакционных смесей | BC022S | 50 реакций | 8 950 | |
| BC022L | 250 реакций | 36 900 | |||
| Cleanup S-Cap | Наборы для очистки ДНК из агарозного геля и реакционных смесей | BC041S | 50 реакций | 8 300 | |
| BC041L | 250 реакций | 34 400 | |||
| Cleanup Mini | Наборы для очистки ДНК из агарозного геля и реакционных смесей | BC023S | 50 реакций | 9 700 | |
| BC023L | 250 реакций | 40 100 | |||
| Cleanup St PCR | Набор для очистки ДНК из реакционных смесей | BC025S | 50 реакций | 7 350 | |
| BC025L | 250 реакций | 30 500 | |||