Конструирование лентивирусов

Лентивирусные векторы являются высокоэффективным средством для доставки чужеродной ДНК в различные типы клеток и находят широкое применение в молекулярно-биологических и биомедицинских исследованиях in vitro и in vivo.

Для создания целевых конструкций используется самоинактивирующийся вектор третьего поколения на основе дефектного вируса иммунодефицита человека, в котором удалено около 80% нуклеотидной последовательности генома HIV-1. Вектор кодирует только переносимую ДНК, и содержит cis-элементы, необходимые для ее упаковки и интеграции.

Преимущества лентивирусных векторов:

- способность интегрироваться в геном клетки-мишени, обеспечивая постоянную экспрессию трансгена;
- возможность доставлять ДНК в труднотрансфецируемые, неделящиеся клетки, в т.ч. первичные дифференцированные клетки, такие как нейроны, макрофаги, гепатоциты;
- возможность клонирования длинных (до 8 т.п.н.) последовательностей ДНК;
- широкий тропизм благодаря упаковке в оболочку вируса везикулярного стоматита;
- низкая иммуногенность при использовании в опытах на животных.

Исходный материал:

Любая нуклеотидная последовательность по выбору заказчика.

Последовательность ДНК для конструирования лентивируса может быть синтезирована или клонирована из предоставленного заказчиком материала (плазмидный вектор, РНК, образец тканей).

Описание работ:

СЕРВИС КАТ.# ОПИСАНИЕ ЦЕНА, РУБ. СРОК ВЫПОЛНЕНИЯ
* Цена и сроки выполнения услуги зависят от длины целевой последовательности, необходимости дополнительных работ по клонированию этой последовательности из биологического материала или ее синтеза.
Конструирование лентивирусов CS050 Конструирование лентивирусного вектора, кодирующего указанную заказчиком последовательность ДНК под контролем универсального промотора.
Наработка лентивирусных частиц с титром 105-106 TU/мл в клетках 293Т в культуральной среде DMEM.
зависит от комплектации заказа* зависит от комплектации заказа*

Сборка лентивирусных частиц происходит в результате коэкспрессии в 293Т клетках хелперных плазмид, кодирующих оболочку вируса везикулярного стоматита и структурные белки вирусных частиц, и генома лентивирусного вектора. Через 2 дня культуральную жидкость, содержащую частицы ленти-вектора, собирают, фильтруют, и определяют титр частиц. Титр частиц, содержащих ген флюоресцентного белка, определяется на трансдуцированных клетках HEK293, титр прочих частиц - по концентрации вирусного капсидного белка р24 в иммуноферментном анализе.

Результат работы (передается Заказчику):

1. ДНК сконструированного лентивирусного вектора, в количестве не менее 3 мкг
2. 10 мл готовых к работе лентивирусных частиц с 105-106 TU/мл в среде DMEM
3. Карта вектора и отчет о результатах работы и проверки титра.


Правила безопасности при работе с лентивирусными векторами

В настоящее время векторы третьего поколения являются наиболее безопасной лентивирусной системой. Хотя лентивирусные векторы не способны к саморепликации и инфекционному циклу, широкий тропизм оболочки VSV-g может привести к ненаправленному переносу трансгена при непосредственном контакте с частицами. Поэтому при манипуляциях с лентивирусными векторами необходимо придерживаться правил работы с патогенами третьей-четвертой групп безопасности. Технология самоинактивации обеспечивает, что после интеграции в геном клетки-мишени вирусный геном не способен к репликации, поэтому вероятность возникновения репликационно-компетентного вируса (RCV) в культуре трансдуцированных клеток ничтожно мала. Проверка безопасности культур трансдуцированных клеток проводится с помощью анализов на белок р24.

Вниманию заказчика

В случае невозможности исполнения заказа, возникшей по вине заказчика (например, неверно предоставленной информации о нуклеотидной последовательности, присланных некачественных биологических материалах), произведенные услуги подлежат оплате в полном объеме.

Конфиденциальность

Евроген сохраняет за собой неэксклюзивное право использовать полученные в процессе выполнения заказа материалы в коммерческих целях, если подобное использование не нарушает права на интеллектуальную собственность заказчика. Евроген гарантирует сохранение конфиденциальности данных, полученных в процессе выполнения и обсуждения заказа.