Реактивы для синтеза кДНК

Синтез первой цепи кДНК

Синтез одноцепочечной комплементарной ДНК на матрице РНК возможен благодаря работе РНК-зависимых ДНК-полимераз, которые также называют обратные транскриптазы или ревертазы. Обратные транскриптазы обнаружены у эукариот, прокариот и ретровирусов.

Ключевая ценность метода обратной транскрипции заключается в том, что он позволяет изучать популяцию РНК в клетке путем перевода ее в более стабильную форму в виде ДНК. Рутинные методы работы с ДНК (ПЦР, ПЦР-РВ, клонирование, секвенирование и др.) позволяют исследовать экспрессию целевых генов, определять нуклеотидные последовательности генов, исследовать сплайсинг, регуляцию работы генов и многие другие процессы, в которых ключевая роль отведена РНК.

Обратная транскриптаза MMLV — ревертаза дикого типа вируса лейкемии мышей MMLV, продукт гена pol MMLV, обладает слабой активностью РНКазы H.

Обратные транскриптазы Mint и Magnus — модифицированные ревертазы MMLV, обладающие повышенной термостабильностью и лишенные активности РНКазы H.

Для подбора обратной транскриптазы, подходящей для вашего исследования, воспользуйтесь таблицей:

ПРОДУКТ КАТ.# ТЕРМИНАЛЬНАЯ
ТРАНСФЕРАЗНАЯ
АКТИВНОСТЬ
ДЛИНА кДНК ВРЕМЯ РЕАКЦИИ КОЛ-ВО РЕАКЦИЙ ЦЕНА,
РУБ.
ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Обратная транскриптаза MMLV SK022S до 8 т.п.о. 60 мин 100–200
SK022L 500–1000
Набор MMLV RT     SK021 50
Обратная          
транскриптаза Mint
SK003 до 8 т.п.о. 60 мин 50–100
Обратная
транскриптаза Magnus
Новинка!
SK006S до 12 т.п.о.             15 мин 50–100
SK006M 250–500

Обратная транскрипция и амплификация кДНК

Одноцепочечная кДНК, растворенная в реакционной смеси, сохраняется недолго: ее желательно использовать в дальнейшей работе как можно быстрее. В зависимости от цели и возможностей исследователя существуют различные подходы для получения амплифицированной кДНК:

– синтез первой цепи кДНК и амплификация интересующего фрагмента кДНК в одной пробирке (одна стадия);
– синтез первой цепи кДНК, затем амплификация интересующего фрагмента в другой пробирке (две стадии);
– синтез первой цепи, затем амплификация кДНК целиком - с созданием библиотеки кДНК
   (две или три стадии, в зависимости от дальнейшего применения библиотеки).

Обратная транскрипция и амплификация кДНК: в одну или в две стадии? (pdf)

Синтез первой цепи и создание полноразмерных библиотек кДНК

ПРОДУКТ КАТ.# ПРИГОТОВЛЕНИЕ
ПОЛНОРАЗМЕРНЫХ
БИБЛИОТЕК
НАПРАВЛЕННОЕ
КЛОНИРОВАНИЕ
БИБЛИОТЕК
ТИП РНК-МАТРИЦЫ КОЛ-ВО РЕАКЦИЙ ЦЕНА,
РУБ.
ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Набор Mint SK001    полиА 20
Набор Mint kit-2     SK005 полиА 20

Синтез первой цепи и амплификация "в одной пробирке"

ПРОДУКТ КАТ.# СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ КОЛ-ВО РЕАКЦИЙ ЦЕНА,
РУБ.
ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Цена действительна на территории РФ и не включает доставку, а также не включает затраты на оформление договора для заказов с суммой менее 10 тысяч рублей. Продукты предназначены только для научно-исследовательских работ. Продукты не предназначены для лечения или диагностики заболеваний.
Набор OneTube RT-PCR TaqMan     SK031S Флуоресцентные зонды типа TaqMan                               100
SK031M 500
Набор OneTube RT-PCR SYBR SK032S Интеркалирующий краситель SYBR Green I           
(входит в состав смеси)
100
SK032M 500
Смесь OneTube RT-PCRmix
Новинка!
SK101S Флуоресцентные зонды типа TaqMan или интеркалирующие красители 100
SK101M 500

Возможно приобрести дополнительно

развернуть
ПРОДУКТ КАТ.# ОПИСАНИЕ КОЛ-ВО ЦЕНА, РУБ. ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Цена действительна на территории РФ и не включает доставку, а также не включает затраты на оформление договора для заказов с суммой менее 10 тысяч рублей. Продукты предназначены только для научно-исследовательских работ. Продукты не предназначены для лечения или диагностики заболеваний.
Геномная ДНК
Геномная ДНК человека NA101 Геномная ДНК из клеточной линии человека Raji, 100 мкг/мл 10 мкг, 100 мкл
Фрагментированная геномная ДНК человека NA102 Фрагментированная геномная ДНК из клеточной линии человека Raji, 100 мкг/мл 10 мкг, 100 мкл
dNTP
Смесь dNTP
(10 мM каждого)
PB006S Смесь dNTP предназначена для использования в ПЦР, реакциях обратной транскрипции и любых других приложениях, требующих синтеза ДНК. 200 мкл, 2 мкмоль
PB006L 2 мл (10 x 200 мкл), 20 мкмоль
Смесь dNTP
(2 мM каждого)
PB032 5 мл, (5 x 1 мл), 2 мкмоль
Набор dNTP
(100 мM)
PB033 Набор dNTP состоит из 4-х пробирок высокоочищенных дезоксинуклеотидов (dATP, dTTP, dGTP, dCTP). Концентрация каждого - 100 мМ. 4 х 250 мкл, 25 мкмоль каждого
Вода
Вода деионизированная, свободная от нуклеаз
Новинка!
PB207S Деионизованная вода высокой очистки для подготовки реакционных смесей для ПЦР, реакциий обратной транскрипции, рестрикции, а также любых ферментативных реакций 7.5 мл (5 х 1.5 мл)
PB207M 50 мл
PB207L 1 л
Буферные растворы
Gel Loading Dye, Blue буфер PB020 Буфер для нанесения образцов ДНК на агарозный гель 7.5 мл (5 x 1.5 мл)
Буфер для разведения ДНК PB021 Буфер для разведения ДНК, не содержит нуклеаз 7.5 мл (5 x 1.5 мл)
Oligo(dT)15 праймер SB001 Олиго(dT)15 праймер
(концентрация 20мкМ)
250 мкл (5 x 50 мкл), 5 нмоль
Random(dN)10 праймер SB002 Случайный декануклеотидный праймер
(концентрация 20 мкМ)
250 мкл (5 x 50 мкл), 5 нмоль
Буфер для синтеза первой цепи кДНК SB003 Реакционный буфер для MMLV ревертазы и Mint ревертазы 1.8 мл
Раствор DTT (дитиотреитола) SB004 Раствор DTT (концентрация 20 мМ) 1 мл
Буфер для разведения и хранения MMLV ревертазы SB005 Буфер для разведения и хранения MMLV ревертазы 2.5 мл (5 x 0.5 мл)

Связанные продукты

развернуть
ПРОДУКТ КАТ.# ОПИСАНИЕ КОЛ-ВО ЦЕНА, РУБ. ИНСТРУКЦИЯ (PDF)
Цена действительна на территории РФ и не включает доставку, а также не включает затраты на оформление договора для заказов с суммой менее 10 тысяч рублей. Продукты предназначены только для научно-исследовательских работ. Продукты не предназначены для лечения или диагностики заболеваний.
Ферменты
ДНКаза Е
Новинка!
EK007S Термостойкая эндонуклеаза, разрушающая ДНК до одноцепочечных олигонуклеотидов 100 е.а.
EK007M 500 е.а.
Реактивы для фиксации, выделения и очистки РНК
Фиксатор IntactRNA BC031 Фиксатор для стабилизации клеточной РНК в тканях и клеточных культурах (аналог RNAlater) на 100 фиксаций по 100 мг ткани
Реагент ExtractRNA BC032 Реагент для выделения суммарной РНК из биологических образцов (аналог TRIzol) на 100 выделений из 100 мг ткани
Набор CleanRNA Standard BC033 Набор для очистки препаратов суммарной РНК 25 процедур
Реактивы для амплификации концевых фрагментов кДНК (RACE)
Набор реактивов Mint RACE cDNA amplification set SKS03 Набор, включающий все необходимые реактивы для синтеза кДНК на основе тотальной или полиА+ РНК и последующей амплификации 5'- и 3'-концевых фрагментов целевых транскриптов 20 р-ций синтеза кДНК +
200 р-ций амплификации объёмом 25 мкл +
25 р-ций лигирования
Набор праймеров Mint RACE primer set SK004 Набор адаптерных смесей (праймеров) для быстрой амплификации концевых фрагментов целевых транскриптов с кДНК-матрицы, приготовленной с помощью набора для синтеза кДНК Mint 200 р-ций объёмом 25 мкл
Реактивы для нормализации кДНК
Дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) EA001 Лиофилизированная дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) 50 ед. Куница
EA002 100 ед. Куница
EA003 10 ед. Куница
Набор реактивов "Trimmer-2" NK003 Набор реактивов для нормализации двухцепочечной кДНК 100 р-ций