Eng | Ru

    ПОИСК ПО САЙТУ

Конструирование лентивирусов

Лентивирусные векторы являются высокоэффективным средством для доставки чужеродной ДНК в различные типы клеток и находят широкое применение в молекулярно-биологических и биомедицинских исследованиях in vitro и in vivo.

Для создания целевых конструкций используется самоинактивирующийся вектор третьего поколения на основе дефектного вируса иммунодефицита человека, в котором удалено около 80% нуклеотидной последовательности генома HIV-1. Вектор кодирует только переносимую ДНК, и содержит cis-элементы, необходимые для ее упаковки и интеграции.

Преимущества лентивирусных векторов:

    - способность интегрироваться в геном клетки-мишени, обеспечивая постоянную экспрессию трансгена
    - возможность доставлять ДНК в труднотрансфецируемые, неделящиеся клетки, в т.ч. первичные дифференцированные клетки, такие как нейроны, макрофаги, гепатоциты
    - возможность клонирования длинных (до 8 т.п.н.) последовательностей ДНК
    - широкий тропизм благодаря упаковке в оболочку вируса везикулярного стоматита
    - низкая иммуногенность при использовании в опытах на животных.

Исходный материал:

Любая нуклеотидная последовательность по выбору заказчика.

Последовательность ДНК для конструирования лентивируса может быть синтезирована или клонирована из предоставленного заказчиком материала (плазмидный вектор, РНК, образец тканей).

Описание работ:

СЕРВИСКАТ.#ОПИСАНИЕЦЕНА, РУБ.СРОК ВЫПОЛНЕНИЯ
* Цена и сроки выполнения услуги зависят от длины целевой последовательности, необходимости дополнительных работ по клонированию этой последовательности из биологического материала или ее синтеза. Воспользуйтесь формой для расчета цены сервиса on-line для уточнения цены и формирования заказа.
Конструирование лентивирусов CS050 Конструирование лентивирусного вектора, кодирующего указанную заказчиком последовательность ДНК под контролем универсального промотора.
Наработка лентивирусных частиц с титром105-106 TU/мл в клетках 293Т в культуральной среде DMEM.
зависит от комплектации заказа* зависит от комплектации заказа*

Сборка лентивирусных частиц происходит в результате коэкспрессии в 293Т клетках хелперных плазмид, кодирующих оболочку вируса везикулярного стоматита и структурные белки вирусных частиц, и генома лентивирусного вектора. Через 2 дня культуральную жидкость, содержащую частицы ленти-вектора, собирают, фильтруют, и определяют титр частиц. Титр частиц, содержащих ген флюоресцентного белка, определяется на трансдуцированных клетках HEK293, титр прочих частиц - по концентрации вирусного капсидного белка р24 в иммуноферментном анализе.

Результат работы (передается Заказчику):

1. ДНК сконструированного лентивирусного вектора, в количестве не менее 3 мкг
2. 10 мл готовых к работе лентивирусных частиц с 105-106 TU/мл в среде DMEM
3. Карта вектора и отчет о результатах работы и проверки титра.


РАСЧЕТ ЦЕНЫ И ЗАКАЗ ON-LINE

 

Правила безопасности при работе с лентивирусными векторами

В настоящее время векторы третьего поколения являются наиболее безопасной лентивирусной системой. Хотя лентивирусные векторы не способны к саморепликации и инфекционному циклу, широкий тропизм оболочки VSV-g может привести к ненаправленному переносу трансгена при непосредственном контакте с частицами. Поэтому при манипуляциях с лентивирусными векторами необходимо придерживаться правил работы с патогенами второй группы безопасности. Технология самоинактивации обеспечивает, что после интеграции в геном клетки-мишени вирусный геном не способен к репликации, поэтому вероятность возникновения репликационно-компетентного вируса (RCV) в культуре трансдуцированных клеток ничтожно мала. Проверка безопасности культур трансдуцированных клеток проводится с помощью анализов на белок р24.

Вниманию заказчика

В случае невозможности исполнения заказа, возникшей по вине заказчика (например, неверно предоставленной информации о нуклеотидной последовательности, присланных некачественных биологических материалах), произведенные услуги подлежат оплате в полном объеме.

Конфиденциальность

Евроген сохраняет за собой неэксклюзивное право использовать полученные в процессе выполнения заказа материалы в коммерческих целях, если подобное использование не нарушает права на интеллектуальную собственность заказчика. Евроген гарантирует сохранение конфиденциальности данных, полученных в процессе выполнения и обсуждения заказа.

© 2002-2016 Евроген.
Евроген, Москва, ул. Миклухо-Маклая 16/10.