Eng | Ru

    ПОИСК ПО САЙТУ

Фотоактивируемые флуоресцентные белки


Фотоактивируемые флуоресцентные белки обладают уникальной способностью менять спектральные характеристики под воздействием интенсивного света определенной длины волны. Это делает их удобным инструментом для мечения клеток, клеточных органелл и белков с целью последующего мониторинга их перемещений внутри живого организма.

После экспрессии белка, отдельные клетки, клеточные органеллы, содержащие флуоресцентный белок, или пул молекул химерного белка, включающего фотоактивируемый репортер и белок-мишень, облучают интенсивным светом определенной длины волны. В облучаемых объектах происходит фотоконверсия фотоактивируемого белка-репортера и изменяются его спектральные характеристики. После этого становиться возможным наблюдать за перемещениями "перекрашенных" объектов в режиме реального времени (Chudakov et al., 2004; Gurskaya et al., 2006; Chudakov et al., 2007).

Фотоактивируемые флуоресцентные белки могут быть также использованы для определения скорости деградации белков-мишеней в клетке. После экспрессии химерного белка, включающего фотоактивируемый репортер и белок-мишень, весь такой белок подвергается фотоконверсии. Полученный пул "перекрашенных" молекул отличается по спектральным характеристикам от новосинтезируемых молекул и изменение интенсивности его флуоресценции отражает процесс деградации белка (Zhang et al., 2007).

Таблица основных свойств фотоактивируемых флуоресцентных белков

БЕЛОК
 
 
PS-CFP2
PA-TagRFP
KFP-Red
до фото-
конверсии
после фото-
конверсии
до фото-
конверсии
после фото-
конверсии
до фото-
конверсии
после фото-
конверсии
* Яркость – произведение коэффициента молярной экстинкции и квантового выхода флуоресценции, деленое на 1000.
К экст. – коэффициент молярной экстинкции.
Цвет флуоресценцииголубойзеленый нет красный нет красный
Максимум возбуждения (нм) 400 490 - 562 580 580
Максимум эмиссии (нм) 468 511 - 595 600 600
Квантовый выход 0,20 0,23 - 0,38 <0,001 0,07
К экст. (M-1cm-1) 43000 47000 - 66000 123000 59000
Яркость* 8,6 10,8 - 25,1 - 4,1
Яркость, % от EGFP 26 33 - 75 - 12
Контраст
2000 раз
540 раз
35-70 раз
Свет активации
УФ (405 нм)
УФ (390-420 нм)
зеленый (530-560 нм)
pKa 4,3 6,1 - 5,3 нет данных нет данных
Структура
мономер
мономер
тетрамер
Агрегация
нет
нет
нет
Токсичность для клеток
не детектируется
не детектируется
не детектируется
Скорость созревания при 37°C
быстрая
быстрая
средняя
Молекулярный вес (кДа)
26
27
26

Список статей:

  • Chudakov DM, Lukyanov S, Lukyanov KA. Tracking intracellular protein movements using photoswitchable fluorescent proteins PS-CFP2 and Dendra2. Nat Protoc. 2007; 2 (8):2024-32. / pmid: 17703215
  • Chudakov DM, Verkhusha VV, Staroverov DB, Souslova EA, Lukyanov S, Lukyanov KA. Photoswitchable cyan fluorescent protein for protein tracking. Nat Biotechnol. 2004; 22 (11):1435-9. / pmid: 15502815
  • Souslova EA, Chudakov DM. Photoswitchable cyan fluorescent protein as a FRET donor. Microsc Res Tech. 2006; 69 (3):207-9. / pmid: 16538627
  • Zhang L, Gurskaya NG, Merzlyak EM, Staroverov DB, Mudrik NN, Samarkina ON, Vinokurov LM, Lukyanov S, Lukyanov KA. Method for real-time monitoring of protein degradation at the single cell level. Biotechniques. 2007; 42 (4):446, 448, 450. / pmid: 17489230
  • Gurskaya NG, Verkhusha VV, Shcheglov AS, Staroverov DB, Chepurnykh TV, Fradkov AF, Lukyanov S, Lukyanov KA. Engineering of a monomeric green-to-red photoactivatable fluorescent protein induced by blue light. Nat Biotechnol. 2006; 24 (4):461-5. / pmid: 16550175
© 2002-2016 Евроген.
Евроген, Москва, ул. Миклухо-Маклая 16/10.